Arrêté du 10 juillet 1986 - Article Annexe V

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Article Annexe V

a) Appareils et réactifs :

Un couteau et des pinces pour le prélèvement des échantillons.

Des plateaux divisés en cinquante carrés pouvant contenir chacun des échantillons de viande d'environ 2 grammes.

Une moulinette.

Un agitateur magnétique pourvu d'une plaque chauffante à température contrôlée et un barreau magnétique (recouvert de teflon), d'environ 5 centimètres.

Des ampoules à décantation coniques d'une capacité de deux litres.

Des supports avec anneaux et fixations.

Des tamis, finesse de maille 177 m, d'un diamètre extérieur de 11 centimètres, pourvus d'un treillis en acier inoxydable.

Des entonnoirs d'un diamètre intérieur d'au moins 12 centimètres destinés à recevoir les tamis.

Un bécher de 3 litres.

Des éprouvettes graduées d'une capacité approximative de 50 millilitres ou des tubes de centrifugation.

Un trichinoscope pourvu d'une table horizontale ou stéréomicroscope disposant d'un éclairage approprié.

Une cuvette pour le comptage des larves (en cas d'utilisation d'un trichinoscope).

La cuvette doit être formée de plaques acryliques d'une épaisseur de 3 millimètres et doit avoir les caractéristiques suivantes :

iii) Fond de la cuvette : 180 x 40 mm, divisé en carrés ;

iii) Plaques latérales : 230 x 20 mm ;

iii) Plaques frontales : 40 x 20 mm.

Le fond et les plaques frontales doivent être fixés entre les plaques latérales de façon à former deux petites poignées aux deux extrémités. La partie supérieure du fond devrait se trouver surélevée de 7 mm à 9 mm par rapport à la base du cadre formé par les plaques latérales et frontales. Fixer les plaques à l'aide d'une colle appropriée au matériau.

Plusieurs boîtes de Pétri (en cas d'utilisation d'un stéréomicroscope dont le fond a été divisé en carrés de 10 x 10 mm à l'aide d'un instrument pointu.

Une feuille d'aluminium.

Solution d'acide chlorhydrique à 25 p. 100.

Pepsine à la concentration 1/10 000 NF (US National Formulary), correspondant à 1/12 500 BP (British Pharmacopoea), correspondant à 2 000 F.I.P. (Fédération internationale de pharmacie).

Eau du robinet chauffée à 46-48 °C.

Plusieurs poubelles de 10 litres à employer lors de la décontamination, par un traitement tel que le formol, de l'appareillage et pour le suc digestif restant en cas de résultat positif.

Une balance d'une précision de 0,1 gramme.

b) Prélèvements des échantillons :

1. Lorsque les carcasses sont entières, prélever un échantillon d'approximativement 2 grammes dans un des piliers du diaphragme dans la zone de transition entre la partie musculaire et la partie tendineuse ; s'il n'y a pas de pilier de diaphragme, prélever la même quantité sur la partie du diaphragme située près des côtes ou du sternum ou sur les muscles masticateurs ou encore sur la musculature abdominale.

2. Pour les morceaux de viande, prélever un échantillon d'approximativement 2 grammes dans les muscles squelettiques, contenant peu de graisse et, dans la mesure du possible, près des os ou des tendons.

c) Méthode :

1. i) Groupes complets d'échantillons (100 à la fois) :

Broyer dans la moulinette 100 échantillons d'environ 1 gramme prélevés sur chaque échantillon individuel conformément aux indications de la lettre b. Faire fonctionner l'appareil trois ou quatre fois pendant une seconde.

Transférer la viande broyée dans un bécher de 3 litres et saupoudrer de 10 grammes de pepsine. Introduire dans le bécher 2 litres d'eau du robinet chauffée à 46-48° C et ajouter 16 ml d'acide chlorhydrique.

Tremper plusieurs fois le dispositif de broyage de la moulinette dans le liquide de digestion se trouvant dans le bécher pour en ôter les substances y adhérant encore.

Placer le barreau magnétique dans le bécher et couvrir celui-ci d'une feuille d'aluminium.

Poser le bécher sur la plaque préchauffée de l'agitateur magnétique et mettre en route l'agitation. Avant de commencer le processus d'agitation, l'agitateur magnétique doit être réglé de telle sorte qu'une température constante de 44-46° C puisse être maintenue pendant le fonctionnement. Au cours du processus d'agitation, le liquide de digestion doit tourner à une vitesse suffisamment élevée pour former un profond tourbillon central sans provoquer d'éclaboussures.

Agiter le liquide de digestion pendant 30 minutes, arrêter l'appareil, filtrer le liquide de digestion au travers un tamis placé dans un entonnoir et recueillir le filtrat dans une ampoule à décantation.

Laisser le liquide de digestion dans l'ampoule à décantation pendant 30 minutes.

Après 30 minutes, transférer rapidement un échantillon de 40 ml du liquide de digestion dans l'éprouvette graduée ou le tube de centrifugation.

Laisser reposer l'échantillon de 40 ml pendant 10 minutes et aspirer ensuite 30 ml de liquide surnageant, laissant ainsi un volume de 10 ml.

L'échantillon de 10 ml de sédiment restant est versé dans une cuvette pour le comptage des larves ou dans la boîte de Pétri. Procéder ensuite à l'observation au trichinoscope ou à l'examen au stéréomicroscope, selon le cas.

Les liquides de digestion doivent être examinés dès qu'ils sont prêts. En aucun cas, l'examen ne doit être remis au lendemain.

Si les liquides de digestion ne sont pas examinés dans un délai de 30 minutes suivant leur préparation, ils doivent être éclaircis comme suit : verser l'échantillon final d'environ 40 ml dans une éprouvette graduée et laisser sédimenter pendant 10 minutes. A l'issue de ce délai, enlever 30 ml du liquide surnageant afin d'obtenir un volume de 10 ml. Ce volume est porté à 40 ml avec de l'eau du robinet. Après une nouvelle période de repos de 10 minutes, enlever 30 ml du liquide surnageant, par aspiration, pour obtenir un volume de 10 ml à examiner dans une boîte de Pétri ou dans une cuvette pour le comptage des larves. Laver l'éprouvette graduée avec 10 ml d'eau du robinet et ajouter le liquide obtenu à l'échantillon dans la boîte Pétri ou dans la cuvette pour le comptage des larves, en vue d'examen.

Si l'examen fait apparaître que le sédiment n'est pas clair, l'échantillon doit être versé dans une éprouvette graduée et son volume doit être porté à 40 ml avec de l'eau du robinet. Ensuite, la méthode précitée est appliquée.

ii) Groupes de moins de 100 échantillons :

15 échantillons de 1 gramme chacun peuvent, le cas échéant, être ajoutés à un groupe de 100 échantillons et examinés en même temps que ces derniers selon la méthode décrite à la lettre c. Plus de 15 échantillons doivent être examinés en tant que groupe complet. Dans le cas de groupes allant jusqu'à 50 échantillons, les liquides de digestion peuvent être réduits à 1 litre.

2. En cas de résultat positif ou douteux de l'examen d'un échantillon collectif, un échantillon de 20 grammes doit être prélevé sur chaque porc conformément aux indications visées à la lettre b ci-avant. De cette façon, des échantillons de vingt groupes de cinq porcs seront examinés. Si les trichines sont décelées dans un groupe d'échantillons de cinq porcs, des échantillons de 20 grammes doivent être prélevés sur chaque animal appartenant à ce groupe et examinés suivant la méthode décrite ci-avant.


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